怎樣保證原位雜交實驗操作時的溫度?
建議儀器操作,人工操作的話要注意:
(1)對熒光原位雜交操作過程中可能使用的一些儀器進行溫控檢查,不符合要求的進行更換。
(2)盡可能地保持環(huán)境溫度在20度以上。
(3)針對需要預熱以達到要求溫度的試劑,在使用前必須使用溫度計對其進行測溫。
(4)同時檢測的樣本不超過4塊,操作一定要迅速,實驗人員要注意一些小部件的溫度,尤其是在冬季。
核酸原位雜交可根據(jù)其檢測物而分為細胞內(nèi)原位雜交和組織切片內(nèi)原位雜交;根據(jù)其所用探針及所要檢測核酸的不同又可分為DNA-DNA, RNA-DNA, RNA-RNA雜交。但不論哪種雜交都必須經(jīng)過組織細胞的固定,預雜交,雜交,沖等一系列洗步驟及自顯影或酶法顯色以顯示雜交結(jié)果。
我們在這兒介紹的是整胚原位雜交,不同于一般的在載片上對細胞和組織切片進行探針雜交及檢測的原位雜交,
原位雜交技術(shù)的實驗結(jié)果
原位雜交技術(shù)的實驗結(jié)果包括陽性信號和陰性信號的判斷標準。陽性信號是指探針與目標核酸序列特異性結(jié)合形成的雙鏈復合物,在顯色反應、熒光染色或性同位素標記下呈現(xiàn)出明顯的信號。陰性信號是指探針未與目標核酸序列結(jié)合,不呈現(xiàn)任何信號。實驗結(jié)果的分析需要結(jié)合探針的特異性和敏感性、組織或細胞的原始結(jié)構(gòu)以及實驗條件等因素綜合進行。