把濾膜放在紙巾上于室溫晾干后,把濾膜(編號面朝上)放在一張保鮮膜上,并在保鮮膜上作幾個不對稱的標記,以使濾膜與性自顯影片位置對應。
用第二張保鮮膜蓋住濾膜。加光片并加上增感屏于-70℃曝光12-16小時。
底片顯影后,在底片上貼一張透明硬紙片。在紙上標記陽性雜交信號的位置,同時在不對稱分布點的位置上作出標記。可從底片上取下透明紙,通過對比紙上的點與瓊脂上的點來鑒定陽性菌落。
原位雜交第二天
1.
1)將探針回收,放于-20C保存(通常探針可重復使用十次左右)。
2)加入50%甲酰胺/2XSSCT溶液1毫升,60℃,放置30分鐘,重復一次。
3)置換2XSSCT1ml,60℃,放置15分鐘。
4)置換0.2XSSCT1ml,60℃,放置30分鐘,重復一次。
2.
1)用MABT洗兩次,每次五分鐘,放在搖床輕輕搖動。
2)室溫下加1ml 1:2:7溶液,時間為一小時。
3)按1:3000的比例在1:2:7溶液中加入酶連,4C 冰箱過夜。
植物原位雜交的應用包括:
研究基因表達:通過觀察熒光信號的位置和數量,可以確定目標基因在植物組織中的表達模式和位置。
染色體定位:將目標基因與染色體中的特定位置進行比較,可以確定目標基因在染色體中的位置和分布。
基因:通過原位雜交技術,可以確定目標基因的序列和位置,為基因提供重要的參考信息。
檢測物種或品種特異性:通過原位雜交技術可以檢測出不同物種或品種之間基因表達的差異,從而為物種或品種特異性研究提供依據。
遺傳育種:通過原位雜交技術可以檢測出不同品種之間基因表達的差異,從而為遺傳育種提供重要的參考信息。