怎樣保證原位雜交實驗操作時的溫度?
建議儀器操作,人工操作的話要注意:
(1)對熒光原位雜交操作過程中可能使用的一些儀器進行溫控檢查,不符合要求的進行更換。
(2)盡可能地保持環(huán)境溫度在20度以上。
(3)針對需要預熱以達到要求溫度的試劑,在使用前必須使用溫度計對其進行測溫。
(4)同時檢測的樣本不超過4塊,操作一定要迅速,實驗人員要注意一些小部件的溫度,尤其是在冬季。
原位雜交第二天
1.
1)將探針回收,放于-20C保存(通常探針可重復使用十次左右)。
2)加入50%甲酰胺/2XSSCT溶液1毫升,60℃,放置30分鐘,重復一次。
3)置換2XSSCT1ml,60℃,放置15分鐘。
4)置換0.2XSSCT1ml,60℃,放置30分鐘,重復一次。
2.
1)用MABT洗兩次,每次五分鐘,放在搖床輕輕搖動。
2)室溫下加1ml 1:2:7溶液,時間為一小時。
3)按1:3000的比例在1:2:7溶液中加入酶連,4C 冰箱過夜。