將32 P標記的雙鏈DNA探針于100℃加熱5分鐘,迅速置于冰浴中。單鏈探針不必變性。將探針加到雜交袋中雜交過夜。雜交期間,盛濾膜的容器應蓋嚴,以防液體蒸發。
雜交結束后,去除雜交液,立即于室溫把濾膜放入大體積(300-500ml)的2×SSC和0.1% SDS溶液中,輕輕振搖5分鐘,并將濾膜至少翻轉一次。重復洗 一次,同時應避免膜干涸。
68℃用300-500ml 1×SSC和0.1% SDS溶液洗膜兩次,每次1-1.5小時。此時已可進行自顯影。如背景很高或實驗要求嚴格的洗膜條件,可用300-500ml 0.2×SSC和0.1% SDS的溶液于68℃將濾膜浸泡60分鐘。
原位雜交是一種生物學技術,它可以在細胞或組織中特定部位檢測DNA或RNA的存在,而不需要將DNA或RNA分離出來。這項技術使用標記的DNA或RNA探針,與細胞或組織中的相應DNA或RNA進行特異性結合,然后通過光學顯微鏡或電子顯微鏡觀察探針的位置和數量。
原位雜交的原理很簡單。DNA或RNA分子具有互補的核苷酸序列,因此可以通過氫鍵相互結合。將標記的DNA或RNA探針與細胞中的DNA或RNA進行雜交,可以特異性地檢測這些探針的位置和數量。探針的數量和位置可以反映DNA或RNA在細胞中的水平和分布。