武漢貝科新肽(查看)-GISH
武漢貝科新肽科技有限公司
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原位雜交技術的原理是什么?有何用途
原位雜交技術的原理是利用核酸分子單鏈之間有互補的堿基序列,將有性或非性的外源核酸(即探針)與組織、細胞或染色體上待測DNA或RNA互補配對,結合成專一的核酸雜交分子,經一定的檢測手段將待測核酸在組織、細胞或染色體上的位置顯示出來。為顯示特定的核酸序列要具備3個重要條件:組織、細胞或染色體的固定、具有能與特定片段互補的核苷酸序列(即探針)、有與探針結合的標記物(曾呈奎等2000)。

和其它實驗方法一樣,必須同時設對照試驗以證明其實驗結果特異性。對照試驗的設置須根據核酸探針和靶核苷酸的種類和現有的可能條件去選定。ISHH的優點是它的高度特異性,它可測定組織、培養的單個細胞或細胞提取物中的核苷酸含量。應用高敏感度的性標記cRNA探針在理想的ISHH的實驗條件下檢測mRNA,其敏感度可達到20個mRNA拷貝/每個細胞。由于雙鏈DNA的穩定性,在用ISHH定位DNA時很少發生丟失,降解,其敏感性高到能夠顯示在染色體鋪片上,有時甚至在組織切片上的單個基因拷貝。正因為如此,對ISHH結果的解釋應持慎重態度,特別是前人未報告過的新發現。

原位雜交(In Situ Hybridization)是指將特定標記的已知核酸序列為探針與細胞或組織切片中核酸進行雜交,從而對特定核酸序列進行定量定位的過程。這個技術可以用于研究細胞或組織中特定基因或DNA序列的表達和定位,從而幫助研究者深入理解和探究生物學過程。原位雜交有幾種不同的類型,包括熒光原位雜交和其他用于基因表達分析的方法。