原位雜交雜交液
(一)雜交液內(nèi)除含一定濃度的標(biāo)記探針外,還含有較高濃度的鹽類、甲酰胺、硫酸葡聚糖、牛白蛋白及載體DNA或RNA等。
(二)雜交液中含有較高濃度的Na+可使雜交率增加,可以減低探針與組織標(biāo)本之間的靜電結(jié)合。
(三)賈酰胺可使雜交溫度降低,所以雜交液中加入適量的甲酰胺,可避免因雜交溫度過高而引起的組織形態(tài)結(jié)構(gòu)的破壞以及標(biāo)本的脫落。
(四)硫酸葡聚糖能與水結(jié)合,從而減少雜交液的有效容積,提高探針有效濃度,以達(dá)到提高雜交率的目的。
核酸原位雜交可根據(jù)其檢測物而分為細(xì)胞內(nèi)原位雜交和組織切片內(nèi)原位雜交;根據(jù)其所用探針及所要檢測核酸的不同又可分為DNA-DNA, RNA-DNA, RNA-RNA雜交。但不論哪種雜交都必須經(jīng)過組織細(xì)胞的固定,預(yù)雜交,雜交,沖等一系列洗步驟及自顯影或酶法顯色以顯示雜交結(jié)果。
我們在這兒介紹的是整胚原位雜交,不同于一般的在載片上對細(xì)胞和組織切片進(jìn)行探針雜交及檢測的原位雜交,
原位雜交技術(shù)還在以下生物領(lǐng)域有應(yīng)用:
生態(tài)學(xué)和環(huán)境科學(xué):在生態(tài)學(xué)和環(huán)境科學(xué)領(lǐng)域,原位雜交技術(shù)可以用于研究生物與環(huán)境之間的相互作用。例如,通過標(biāo)記特定基因的探針,可以檢測環(huán)境中微生物種群的分布和變化,進(jìn)而研究其對環(huán)境的影響和作用。
進(jìn)化生物學(xué):在進(jìn)化生物學(xué)領(lǐng)域,原位雜交技術(shù)可以用于研究物種之間的遺傳差異和進(jìn)化關(guān)系。例如,通過比較不同物種之間基因序列的差異,可以揭示物種之間的親緣關(guān)系和進(jìn)化歷程。