核酸原位雜交可根據(jù)其檢測物而分為細(xì)胞內(nèi)原位雜交和組織切片內(nèi)原位雜交;根據(jù)其所用探針及所要檢測核酸的不同又可分為DNA-DNA, RNA-DNA, RNA-RNA雜交。但不論哪種雜交都必須經(jīng)過組織細(xì)胞的固定,預(yù)雜交,雜交,沖等一系列洗步驟及自顯影或酶法顯色以顯示雜交結(jié)果。
我們在這兒介紹的是整胚原位雜交,不同于一般的在載片上對細(xì)胞和組織切片進(jìn)行探針雜交及檢測的原位雜交,
原位雜交技術(shù)的技術(shù)流程
原位雜交技術(shù)的技術(shù)流程包括樣本處理、探針制備、雜交反應(yīng)和信號檢測等步驟。樣本處理包括組織或細(xì)胞的固定、包埋、切片和脫氧核糖核酸酶消化等步驟,目的是保持組織或細(xì)胞的原始結(jié)構(gòu)和核酸序列的完整性。探針制備包括標(biāo)記探針、純化和變性等步驟,目的是提高探針的特異性和敏感性。雜交反應(yīng)包括預(yù)雜交、雜交和洗脫等步驟,目的是使探針與目標(biāo)核酸序列形成雙鏈復(fù)合物。信號檢測包括顯色反應(yīng)、熒光染色和性同位素標(biāo)記等步驟,目的是可視化目標(biāo)核酸序列的分布。