GISH-貝科新肽(在線咨詢)
武漢貝科新肽科技有限公司
- 主營產品：原位雜交,亞細胞定位,蛋白互作,啟動子篩選
- 公司地址：湖北省武漢市洪山區關山大道289號紫菘逸景華庭二期109棟2層2002-3號
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原位雜交技術方法大致可分為：1.雜交前準備，包括固定、取材、玻片和組織的處理，如何增強核酸探針的穿透性、減低背景染色等；2.雜交；3.雜交后處理；4.顯示（visualization）：包括性自顯影和非性標記的顯色。固定原位雜交組織化學技術在固定劑的應用和選擇上應兼顧到三個方面：保持細胞結構，限度地保持細胞內DNA或RNA的水平；使探針易于進入細胞或組織。DNA是比較穩定的，mRNA是相對穩定的但易為酶合成和降解。RNA卻絕然不同，非常容易被降解。因此，對于DNA的定位來說，固定劑的種類和濃度并不十分重要。相反，在RNA的定位上，如果要使RNA的降解減少到低限度，那么，不僅固定劑的種類濃度和固定的時間十分重要，而且取材后應盡快予以冷凍或固定。
原位雜交第二天
1.
1）將探針回收，放于－20C保存(通常探針可重復使用十次左右)。
2）加入50%甲酰胺/2XSSCT溶液1毫升，60℃，放置30分鐘，重復一次。
3）置換2XSSCT1ml，60℃，放置15分鐘。
4）置換0.2XSSCT1ml，60℃，放置30分鐘，重復一次。
2.
1）用MABT洗兩次，每次五分鐘，放在搖床輕輕搖動。
2）室溫下加1ml 1：2：7溶液，時間為一小時。
3）按1：3000的比例在1：2：7溶液中加入酶連，4C 冰箱過夜。
FISH技術的基本步驟包括探針制備、樣品預處理、探針與樣品的雜交、信號檢測和圖像分析等。在探針制備過程中，使用熒光標記物代替同位素標記物來標記探針。在樣品預處理過程中，細胞或組織的固定、裂解和去除非特異性蛋白質等操作都是必要的，以提高探針與目標序列的親和力和特異性。在探針與樣品的雜交過程中，探針與樣品中的目標序列進行互補性雜交，形成可檢測的熒光信號。在信號檢測和圖像分析過程中，使用高靈敏度熒光顯微鏡檢測熒光信號并獲取高分辨率的細胞圖像。
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