為什么不先對(duì)一個(gè)基因做預(yù)測(cè),在預(yù)測(cè)的結(jié)果上直接做共定位?
不同的預(yù)測(cè)網(wǎng)站有不同的計(jì)算方法,同一個(gè)基因在不同的預(yù)測(cè)網(wǎng)站也可能得出不同的定位結(jié)果。另外所有的結(jié)果都應(yīng)是基于實(shí)驗(yàn)得到的,對(duì)于不清楚可能定位在哪里的基因,一般推薦先做普通定位,根據(jù)普通定位的結(jié)果再?zèng)Q定做哪種細(xì)胞器的共定位。
為什么有的基因做原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化時(shí)熒光蛋白不亮?
不同物種的細(xì)胞可能對(duì)基因表達(dá)有影響,當(dāng)在一種材料的原生質(zhì)體中觀察不到熒光時(shí),可以考慮換一種受體材料。另外,如果是分泌蛋白,在原生質(zhì)體中無法觀察到熒光,此時(shí)可以考慮注射葉片來觀察熒光。
拍攝時(shí)為什么有明場(chǎng)通道?
(1)顯示細(xì)胞狀態(tài),有活力的原生質(zhì)體細(xì)胞應(yīng)該是飽滿圓潤(rùn)的,變形或破碎的細(xì)胞說明此時(shí)細(xì)胞不是適狀態(tài)或細(xì)胞已。
(2)顯示熒光確實(shí)是細(xì)胞內(nèi)蛋白表達(dá)的,而不是細(xì)胞碎片及雜質(zhì)產(chǎn)生的雜光。
洋蔥亞細(xì)胞定位的方法包括但不限于以下三種:
熒光法:利用抗原與的特異性結(jié)合,在細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生熒光標(biāo)記,從而確定細(xì)胞內(nèi)抗原的分布位置。
GFP融合蛋白表達(dá)法:將目的蛋白與綠色熒光蛋白(GFP)融合,通過熒光顯微鏡觀察綠色熒光蛋白的表達(dá)位置。
亞細(xì)胞分離法:通過一定的物理或化學(xué)方法,將細(xì)胞進(jìn)行破碎,然后通過離心、密度梯度離心等方法將細(xì)胞器分離出來,再對(duì)分離出來的各個(gè)細(xì)胞器進(jìn)行成分和結(jié)構(gòu)分析。
植物細(xì)胞中的另一個(gè)重要組成部分是液泡。液泡是充滿液體的囊泡,它們?cè)诩?xì)胞的中央位置,并且包含著大量的水分和離子。液泡對(duì)于細(xì)胞的形態(tài)、生長(zhǎng)和發(fā)育都起著重要的作用,同時(shí)也在細(xì)胞內(nèi)起著重要的儲(chǔ)存作用。
植物細(xì)胞的另一個(gè)特點(diǎn)是它們具有葉綠體。葉綠體是進(jìn)行光合作用的地方,它們含有綠色的葉綠素,可以幫助植物吸收太陽光能,并將其轉(zhuǎn)化為化學(xué)能,為植物的生長(zhǎng)和發(fā)育提供能量。