亞細胞定位原理
利用GFP、RFP等熒光蛋白具有的熒光性質和靈敏性，來示蹤細胞內的蛋白。將目標蛋白與熒光蛋白的N端或者C端融合，通過瞬轉或穩轉，使該融合蛋白在受體材料細胞內表達，目標蛋白會牽引熒光蛋白一起定位到目標細胞器，經過激光共聚焦顯微鏡激光照射，熒光蛋白會發出熒光，通過觀察熒光蛋白在細胞內顯示的位置，從而可以確定目標蛋白的亞細胞定位情況，即可對蛋白質進行準確定位。
亞細胞定位操作步驟
1、通過一些在線網站預測亞細胞定位
2、亞細胞定位載體構建
（1）引物設計：利用引物設計軟件，根據pEGP-MCS-N1或pEGP-C1-MCS的酶切位點設計目的基因引物。
（2）載體構建：將PCR產物酶切后插入pEGP-MCS-N1或pEF-C1-MCS，得到表達目的基因與EGP融合蛋白質的真核表達載體。
3、細胞轉染
當細胞生長到對數生長期時，接種到共聚焦顯微鏡的玻璃底培養皿（35mm petri dish，10 mm Microwell）中，培養過夜。當細胞貼壁率達到30%~50%時，將融合綠色熒光蛋白GFP的重組載體質粒和目標細胞器質粒共轉染細胞。37℃孵箱培養24~72h。
4、激光掃描共聚焦顯微鏡觀察
將上述細胞分別在24、36、48、72h的時間點，根據實驗需求選擇對應激發波長（常用405nm、488nm和561nm），使用共聚焦顯微鏡觀察，采取圖像。
洋蔥亞細胞定位的方法包括但不限于以下三種：
熒光法：利用抗原與的特異性結合，在細胞內產生熒光標記，從而確定細胞內抗原的分布位置。
GFP融合蛋白表達法：將目的蛋白與綠色熒光蛋白(GFP)融合，通過熒光顯微鏡觀察綠色熒光蛋白的表達位置。
亞細胞分離法：通過一定的物理或化學方法，將細胞進行破碎，然后通過離心、密度梯度離心等方法將細胞器分離出來，再對分離出來的各個細胞器進行成分和結構分析。
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