菌落的裂解及DNA結合于纖維素濾膜
（1） 在一張保鮮膜上制作一個裝有0.5mol/L NaOH的小洼（0.75ml），使菌落面朝上，將濾膜放到小洼上，展平保鮮膜，使濾膜均勻濕潤，讓濾膜留于原處2-3分鐘。
（2） 用干紙巾從濾膜的下方吸干濾膜，用一張新的保鮮膜和新配制的0.5mol/L NaOH重復步驟（1）。
（3） 吸干濾膜，將濾膜轉移到新的帶有1mol/L Tris·Cl(pH7.4）的保鮮膜洼上。5分鐘后吸干濾膜，再重復一次該步驟。
（4） 吸干濾膜，把它轉移到有1.5mol/L NaCl、0.5mol/L Tris·Cl (pH7.4）的保鮮膜小洼上5分鐘后吸干濾膜，轉移到一張干的濾紙上，置于室溫20-30分鐘，使濾膜干燥。
（5） 將濾膜夾在兩張干的濾紙之間，在真空烤箱中于80℃干烤2小時，固定DNA。
（6） 將固定在膜上的DNA與32 P標記的RNA進行雜交。
原位雜交第二天
1.
1）將探針回收，放于－20C保存(通常探針可重復使用十次左右)。
2）加入50%甲酰胺/2XSSCT溶液1毫升，60℃，放置30分鐘，重復一次。
3）置換2XSSCT1ml，60℃，放置15分鐘。
4）置換0.2XSSCT1ml，60℃，放置30分鐘，重復一次。
2.
1）用MABT洗兩次，每次五分鐘，放在搖床輕輕搖動。
2）室溫下加1ml 1：2：7溶液，時間為一小時。
3）按1：3000的比例在1：2：7溶液中加入酶連，4C 冰箱過夜。
原位雜交技術還在以下生物領域有應用：
生態學和環境科學：在生態學和環境科學領域，原位雜交技術可以用于研究生物與環境之間的相互作用。例如，通過標記特定基因的探針，可以檢測環境中微生物種群的分布和變化，進而研究其對環境的影響和作用。
進化生物學：在進化生物學領域，原位雜交技術可以用于研究物種之間的遺傳差異和進化關系。例如，通過比較不同物種之間基因序列的差異，可以揭示物種之間的親緣關系和進化歷程。
掃一掃手機網站
在線客服
15002786799
81680037@qq.com