原位雜交雜交液
(一)雜交液內(nèi)除含一定濃度的標(biāo)記探針外,還含有較高濃度的鹽類、甲酰胺、硫酸葡聚糖、牛白蛋白及載體DNA或RNA等。
(二)雜交液中含有較高濃度的Na+可使雜交率增加,可以減低探針與組織標(biāo)本之間的靜電結(jié)合。
(三)賈酰胺可使雜交溫度降低,所以雜交液中加入適量的甲酰胺,可避免因雜交溫度過高而引起的組織形態(tài)結(jié)構(gòu)的破壞以及標(biāo)本的脫落。
(四)硫酸葡聚糖能與水結(jié)合,從而減少雜交液的有效容積,提高探針有效濃度,以達(dá)到提高雜交率的目的。
植物染色體原位雜交是一種重要的分子生物學(xué)技術(shù),它可以用來研究植物基因組的結(jié)構(gòu)和功能。該技術(shù)利用DNA探針與目標(biāo)DNA序列的互補(bǔ)性結(jié)合,通過熒光或性標(biāo)記來檢測(cè)目標(biāo)DNA序列在染色體上的位置和數(shù)量。
植物染色體原位雜交技術(shù)的基本原理是將DNA探針標(biāo)記上熒光或性同位素,然后將其與目標(biāo)DNA序列進(jìn)行雜交。在雜交過程中,探針與目標(biāo)DNA序列互補(bǔ)結(jié)合,形成穩(wěn)定的雙鏈DNA分子。隨后,通過熒光或性同位素探測(cè)技術(shù),可以檢測(cè)到目標(biāo)DNA序列在染色體上的位置和數(shù)量。
植物原位雜交在遺傳育種方面的應(yīng)用主要包括:
異源染色質(zhì)及多種染色體畸變檢測(cè):通過遠(yuǎn)緣雜交把有用遺傳物質(zhì)基因的異源染色質(zhì)漸滲到植物中。如帶有幾種抗病基因的黑麥1R染色體已被整合到許多高產(chǎn)的小麥品種中。原位雜交技術(shù)則是鑒定外源染色體(質(zhì))的有效手段。
基因組印記研究:基因組印記是指一個(gè)基因的兩條染色體上的DNA序列存在差異。通過植物原位雜交技術(shù),可以檢測(cè)到基因組印記的存在和分布,從而幫助確定基因組的進(jìn)化、遺傳和功能特征。