原位雜交-原位雜交公司-武漢貝科新肽科技公司
武漢貝科新肽科技有限公司
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FISH是原位雜交技術(shù)大家族中的一員，因其所用探針被熒光物質(zhì)標(biāo)記（間接或直接）而得名，該方法在80年代末 被發(fā)明，現(xiàn)已從實驗室逐步進(jìn)入臨床診斷領(lǐng)域。基本原理是熒光標(biāo)記的核酸探針在變性后與已變性的靶核酸在退火 溫度下復(fù)性；通過熒光顯微鏡觀察熒光信號可在不改變被分析對象（即維持其原位）的前提下對靶核酸進(jìn)行分析。DNA熒光標(biāo)記探針是其中常用的一類核酸探針。利用此探針可對組織、細(xì)胞或染色體中的DNA進(jìn)行染色體及基因水平 的分析。熒光標(biāo)記探針不對環(huán)境構(gòu)成污染，靈敏度能得到保障，可進(jìn)行多色觀察分析，因而可同時使用多個探針，縮 短因單個探針分開使用導(dǎo)致的周期過程和技術(shù)障礙。
把濾膜放在紙巾上于室溫晾干后，把濾膜（編號面朝上）放在一張保鮮膜上，并在保鮮膜上作幾個不對稱的標(biāo)記，以使濾膜與性自顯影片位置對應(yīng)。
用第二張保鮮膜蓋住濾膜。加光片并加上增感屏于-70℃曝光12-16小時。
底片顯影后，在底片上貼一張透明硬紙片。在紙上標(biāo)記陽性雜交信號的位置，同時在不對稱分布點的位置上作出標(biāo)記。可從底片上取下透明紙，通過對比紙上的點與瓊脂上的點來鑒定陽性菌落。
和其它實驗方法一樣，必須同時設(shè)對照試驗以證明其實驗結(jié)果特異性。對照試驗的設(shè)置須根據(jù)核酸探針和靶核苷酸的種類和現(xiàn)有的可能條件去選定。ISHH的優(yōu)點是它的高度特異性，它可測定組織、培養(yǎng)的單個細(xì)胞或細(xì)胞提取物中的核苷酸含量。應(yīng)用高敏感度的性標(biāo)記cRNA探針在理想的ISHH的實驗條件下檢測mRNA，其敏感度可達(dá)到20個mRNA拷貝/每個細(xì)胞。由于雙鏈DNA的穩(wěn)定性，在用ISHH定位DNA時很少發(fā)生丟失，降解，其敏感性高到能夠顯示在染色體鋪片上，有時甚至在組織切片上的單個基因拷貝。正因為如此，對ISHH結(jié)果的解釋應(yīng)持慎重態(tài)度，特別是前人未報告過的新發(fā)現(xiàn)。
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