核酸原位雜交可根據(jù)其檢測(cè)物而分為細(xì)胞內(nèi)原位雜交和組織切片內(nèi)原位雜交;根據(jù)其所用探針及所要檢測(cè)核酸的不同又可分為DNA-DNA, RNA-DNA, RNA-RNA雜交。但不論哪種雜交都必須經(jīng)過(guò)組織細(xì)胞的固定,預(yù)雜交,雜交,沖等一系列洗步驟及自顯影或酶法顯色以顯示雜交結(jié)果。
我們?cè)谶@兒介紹的是整胚原位雜交,不同于一般的在載片上對(duì)細(xì)胞和組織切片進(jìn)行探針雜交及檢測(cè)的原位雜交,
原位雜交技術(shù)的定義和基本原理原位雜交技術(shù)是一種基于核酸分子雜交原理,將標(biāo)記的核酸探針與生物組織或細(xì)胞中的DNA或RNA進(jìn)行特異性結(jié)合,從而在細(xì)胞水平上檢測(cè)目標(biāo)核酸序列分布的技術(shù)。原位雜交技術(shù)的基本原理是利用DNA或RNA的互補(bǔ)性,通過(guò)加熱或化學(xué)反應(yīng)使探針與組織或細(xì)胞中的目標(biāo)核酸序列形成雙鏈復(fù)合物,進(jìn)而實(shí)現(xiàn)目標(biāo)核酸序列的定位。
熒光原位雜交(FISH)技術(shù)具有以下優(yōu)點(diǎn):
高特異性:熒光探針的合成是定向的,保證了雜交過(guò)程的特異性,可以有效地降低非特異性雜交和背景干擾。
高靈敏度:熒光信號(hào)的檢測(cè)比性信號(hào)的檢測(cè)更靈敏,可以檢測(cè)出低拷貝數(shù)的DNA序列,甚至可以檢測(cè)單個(gè)基因序列。
快速簡(jiǎn)便:FISH技術(shù)操作簡(jiǎn)便,雜交過(guò)程可以在數(shù)小時(shí)或數(shù)天內(nèi)完成,而且不需要過(guò)于復(fù)雜的設(shè)備,便于在實(shí)驗(yàn)室開(kāi)展。