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原位雜交-植物組織原位雜交-武漢貝科新肽公司(多圖)

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DNA 探針為原位雜交提供較高的靈敏度。與RNA探針相比，DNA探針與靶mRNA 分子的雜交強度較弱，因此在雜交后的洗滌中不應使用甲醛。

探針特異性至關重要。如果已知細胞中mRNA或DNA的確切核苷酸序列，則可據此設計高度的互補探針。如果超過 5% 的堿基對不互補，那么探針只能與靶序列發(fā)生輕度雜交。這意味著，探針更容易在洗滌和檢測步驟中被洗去，可能無法正確檢測。

原位雜交雜交液

（一）雜交液內除含一定濃度的標記探針外，還含有較高濃度的鹽類、甲酰胺、硫酸葡聚糖、牛白蛋白及載體DNA或RNA等。

（二）雜交液中含有較高濃度的Na+可使雜交率增加，可以減低探針與組織標本之間的靜電結合。

（三）賈酰胺可使雜交溫度降低，所以雜交液中加入適量的甲酰胺，可避免因雜交溫度過高而引起的組織形態(tài)結構的破壞以及標本的脫落。

（四）硫酸葡聚糖能與水結合，從而減少雜交液的有效容積，提高探針有效濃度，以達到提高雜交率的目的。

熒光原位雜交（FISH）技術具有以下優(yōu)點：

高特異性：熒光探針的合成是定向的，保證了雜交過程的特異性，可以有效地降低非特異性雜交和背景干擾。

高靈敏度：熒光信號的檢測比性信號的檢測更靈敏，可以檢測出低拷貝數(shù)的DNA序列，甚至可以檢測單個基因序列。

快速簡便：FISH技術操作簡便，雜交過程可以在數(shù)小時或數(shù)天內完成，而且不需要過于復雜的設備，便于在實驗室開展。

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