貝科新肽(查看)-湖北白黎蘆醇大腸桿菌表達方法
武漢貝科新肽科技有限公司
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白藜蘆醇的生物合成主要有兩種途徑:苯丙烷途徑和苯甲酸途徑。苯丙烷途徑:這是白藜蘆醇生物合成的主要途徑。起始物為苯丙氨酸,經(jīng)過一系列酶的催化作用,如苯丙氨酸首先被苯丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(PAL)催化轉(zhuǎn)化為酸,然后經(jīng)過酸羧化酶(C4H)和另一種酶的作用,終生成白藜蘆醇。苯甲酸途徑:起始物為苯甲酸,經(jīng)羥化酶的催化作用,生成對羥基。對羥基進一步被特定的酶催化,終生成白藜蘆醇。

白藜蘆醇在大腸桿菌中的表達方法主要涉及到基因工程技術(shù)和代謝工程技術(shù)的應(yīng)用。以下是基本步驟:基因克’隆:首先,從已知能合成白藜蘆醇的植物(如葡萄、花生等)中克’隆出與白藜蘆醇合成相關(guān)的關(guān)鍵酶基因,如苯丙氨酸解氨酶(PAL)、肉’桂酸-4-羥化酶(C4H)、4-香豆酸:CoA連接酶(4CL)和芪合酶(STS)等。構(gòu)建表達載體:將這些關(guān)鍵酶基因插入到適合大腸桿菌表達的載體中,如pET、pBAD等,并添加適當?shù)膯幼雍徒K止子,以確保基因在大腸桿菌中能夠正確表達。

白藜蘆醇并不是大腸桿菌表達系統(tǒng)中常用的表達產(chǎn)物。大腸桿菌表達系統(tǒng)主要用于生產(chǎn)各種外源蛋白,這些蛋白可能是人類或其他生物的蛋白質(zhì),具有各種生物功能。
然而,近年來,由于白藜蘆醇的多種生物活性,如抗’氧化、抗’炎、抗’癌等,人們開始嘗試通過基因工程手段在大腸桿菌中表達白藜蘆醇合成途徑中的關(guān)鍵酶基因,以期望提高白藜蘆醇的產(chǎn)量。這種策略被稱為代謝工程或合成生物學。